自動對焦顯微鏡的傳統聚焦方法：
1、圖像遷移方法
圖像偏移方法采用三角測量測距原理。被攝體發出的光一起進入測距儀的左右兩端，并在接收元件上成像。在兩組之間進行信號比較后，獲得合適的聚焦位置
2、PSD測距方法
PSD測距系統是另一種基于三角測距原理的主動聚焦技術31。紅外發光管通過準直透鏡向目標發射紅外輻射，通過接收透鏡收集物體的漫反射輻射，并匯聚在定向檢測裝置PSD上。通過檢測和計算PSD輸出電流的比值，得到被測物體的物距，然后通過透鏡控制系統實現主動聚焦。
3、對比法
當系統對焦時，圖像對比度最；當系統離焦時，圖像的對比度降低。離焦量越大，對比度越低。因此，它可以用于一維CCD的對比度檢測，根據檢測結果判斷是否聚焦，并聚焦離焦情況。
自動對焦顯微鏡基于數字圖像處理的主動聚焦顯微鏡聚焦方法:
在數字成像系統中，可以通過數字圖像處理實現主動聚焦。數字圖像處理的聚焦方法可分為兩類：聚焦深度法和離焦深度法331。聚焦深度法
聚焦深度(DFF)是一種基于搜索過程的聚焦方法。它通過一系列聚焦逐漸精確的圖像來確定從物體點到成像系統的距離。此搜索過程需要不同成像參數下的多張圖片。使用的圖片越多，對焦精度越高。理想的聚焦點評價函數要求是單峰的、單調的，并在最佳聚焦位置獲得最大值。為了準確檢測峰值的方位角，減少由于噪聲引起的局部最大值邊緣凸起效應所造成的干擾，可以使用斐波那契搜索法和高斯曲線擬合法。
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